大鼠凝血酶(Thrombin)活性ELISA試劑盒檢測具體方法和注意事項說明

大鼠凝血酶(Thrombin)ELISA試劑盒檢測方法的解析：一開始，試劑盒沒有打開的時候，所有試劑都需要按照試劑瓶上面的標簽所示來保存。值得在意的是，收到試劑盒后請盡快將標準品、孔板保存于-20℃。接著，我們再來看看具體的方法吧：

1、ELISA實驗的類型

抗原捕獲是多種類型中的一個共同點。一般捕獲形式包括將抗原吸附到微孔板或者用微孔板上的抗體進行捕獲。

通常大家使用雙抗夾心法進行ELISA實驗，雙抗夾心法中抗原被夾在捕獲抗體和檢測抗體之間，這種方法既靈敏又有效，受到了許多研究者的青睞。不過有時候雙抗夾心法并不是*選擇，例如有時候抗原特別小讓兩個大抗體難以附著，又或者抗體只有一個抗體結合位點。在上述情況下，競爭性ELISA就更為適用，這種方法是采用帶標記的純化抗原與樣本中無標記的抗原進行競爭，以結合捕獲抗體。

此外，我們還需要根據自身需要選擇96孔板或是48孔板進行ELISA實驗。

2、交叉反應

如果抗體間發生沖突或交叉反應就會影響整個實驗的特異性。其中抗體來源所帶來的兼容性就是交叉反應的一個因素。盡管現在購買源自動物的抗體越來越容易，我們仍有必要確認一下是否會產生交叉反應的問題。在用雙抗夾心法進行ELISA檢測時，檢測用的二抗必須特異性針對檢測一抗，而不能與捕獲抗體起反應。如果檢測用二抗與捕獲抗體結合，實驗特異性就會大打折扣。通常我們選用源自不同宿主的捕獲抗體和檢測一抗，來避免上述問題。

3、檢測方式

如今檢測ELISA有許多途徑，我們可以根據自己的偏好進行選擇。一般ELISA檢測的是酶促反應的可溶性產物，抗體上結合有相應的酶，而反應體系中添加有相應的底物。這種酶促反應生成具有特征性的顏色，可以通過分光光度計進行檢測，堿性磷酸酶AP也是一種常用酶。酶可以結合在一抗上，也可以結合在二抗上，還可以使用鏈霉親和素標記的酶與親和素標記的一抗結合。此外ELISA的結果檢測還包括放射性檢測、熒光檢測、化學發光或顯色法檢測等。

4、提出的特別注意

1. 按試劑盒說明書的要求準備實驗中需用的試劑。

2. 試劑盒中用的蒸餾水或去離子水，包括用于洗滌的，應為新鮮的和高質量的。

3. 自配的緩沖液應用pH計測量較正。

4. 試劑盒中本次試驗不需用的部分應及時放回冰箱保存。

5、elISA試劑盒的評價角度思考

1. 靈敏度：

①為試劑檢出被檢物質的zui低量的能力;

②為試劑對大量樣品中陽性檢出的能力。

2. 特異性、精密度、準確度、簡便性、安全性。

3. 經濟性：試劑在同等質量條件下通過大規模生產或技術進步降低成本，而市場價格比較合理;

4. 試劑評價：需要有的確證方法和確證的樣品進行檢測。