人乳頭瘤病毒16型探針法熒光定量PCR試劑盒
產品及特點
人乳頭瘤病毒(Human Papillomavirus，HPV)是一種屬于乳多空病毒科的乳頭瘤空泡病毒A屬，屬于DNA病毒，能引起人體皮膚黏膜的鱗狀上皮增殖，表現為尋常疣、生殖器疣（尖銳濕疣）等癥狀。隨著性病中尖銳濕疣的發病率急速上升和宮頸癌、肛門癌等的增多，人乳頭瘤病毒感染越來越引起人們的關注。人乳頭瘤病毒有很130多種型，其中人乳頭瘤病毒16型（HPV-16）屬于高危型，因此快速準確鑒定HPV-16對該上述疾病的預防和檢疫有著重要作用，本產品就是以探針法熒光定量PCR技術為基礎開發的專門檢測HPV-16的試劑盒，它具有下列特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供樣品DNA模板。
2. 引物和探針經過優化，分析靈敏性高，可以達到100拷貝/反應。
3. 提供陽性對照，便于區分假陰性樣品。
4. 特異性高，引物是根據HPV-16型DNA高度保守區設計，不會跟其他病毒的DNA發生交叉反應。
5. 既可用于定性檢測，又可用于定量檢測。用于定量檢測時線性范圍至少為5
個數量級。
6. 本產品足夠50次20μL體系的探針法熒光定量PCR反應。
7. 本產品只能用于科研。
規格及成分
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成分
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規格
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包裝
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2×Probe qPCR MasterMix
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500μL
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0.5mL本色管
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熒光PCR模板專用稀釋
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1mL
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1.5mL紅蓋管
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超純水
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1mL
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1.5mL紫蓋管
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HPV-16 qPCR引物-探針混合液干粉
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50次
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0.5mL棕色管
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HPV-16 qPCR陽性對照(1×10E7拷貝/μL)
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50μL
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0.5mL黃蓋管
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使用手冊
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1份
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無
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本產品采用五孔盒包裝
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注 意：引物-探針干粉在使用前需要短暫離心，然后在離心管中加入165μL的超純水充分混勻后再使用，未用完的需要-20℃保存。
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使用方法
稀釋標準曲線樣品以1E1-1E6拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例
由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對照。
1. 標記6個離心管，分別為6，5，4，3，2，1。
2. 用帶芯槍頭分別加入45μL熒光PCR專用模板稀釋液，用帶芯槍頭，下同。
3. 在6號管中加入5μL1×10E7拷貝/μL的陽性對照(試劑盒提供)，充分震
蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在5號管中加入5μL1×10E6拷貝/μL的陽性對照(上步稀釋所
得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在4號管中加入5μL1×10E5拷貝/μL的陽性對照(上步所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E4拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
樣品DNA的制備
7. 如果有N個樣品，設置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）。可以用10μL上步所得4號稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。
8. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數樣品DNA 提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的免提取核酸釋放劑。
Probe qPCR反應20μL體系，在樣品制備室進行
9. 如果做定量分析并且只做1次重復，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照（用水做模板），6個用于標準曲線。如果做定性分析并且只做1次重復，則標記N+4個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照（用水做模板），1個用于PCR陽性對照（直接用第6步第4號管的陽性對照稀釋液做模板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。
數據處理
1. 如果把本試劑盒用于定量檢測，則以陽性對照濃度的log值為橫軸，以Ct值為縱軸，繪制標準曲線。再以待測樣品的Ct值從標準曲線上推算出樣品DNA濃度的log值，再推算出其濃度。
2. 如果把本試劑盒用于定性檢測，只判斷陽性或陰性，則陰性對照必須無Ct或Ct大于或等于40。陽性對照必須有熒光對數增長，有典型擴增曲線，Ct值應該小于40，否則實驗無效。如果實驗有效，則分析待測樣品，如果無Ct或Ct大于或等于40，則為陰性。如果Ct小于40則為陽性。
自備試劑
樣品DNA，核酸純化試劑盒
運輸及保存
低溫運輸，-20℃保存，有效期2年
