禽腺病毒I群探針法熒光定量PCR試劑盒

品牌：紀寧生物
貨號：JN-E1475
規格： 50T

自備試劑：超純水，樣品DNA
保存條件：低溫運輸，-20℃保存，有效期2年
保質期：2年

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產品詳情

禽腺病毒I群探針法熒光定量PCR試劑盒

產品及特點

本產品是以探針法熒光定量PCR技術為基礎開發的專門檢測禽腺病毒I群（Fowl Adenovirus Group I，FAdV1）的試劑盒。禽腺病毒I群屬于腺病毒科禽腺病毒屬,是一種無囊膜的雙鏈DNA病毒,基因組大小約為43 kb，是常見的家禽傳染病病原。該病毒衣殼呈規則的20面體結構，直徑約80～110 nm。禽腺病毒I群主要侵害幼齡雞群，特別是3~8周齡的育雛、育成期肉雞，病死率可達 80%。禽腺病毒I群感染給養殖業帶來巨大危害，快速檢測禽腺病毒I群具有重要意義。為此本公司開發了禽腺病毒I群探針法qPCR試劑盒。它具有下列特點：

1. 即開即用，用戶只需要提供樣品DNA模板。

2. 引物和探針經過優化，靈敏度高，檢測限可達100拷貝/反應。

3. 提供陽性對照，便于區分假陰性實驗。

4. 特異性高，引物和探針是根據禽腺病毒I群基因組DNA高度保守區設計的，不會跟其它生物的DNA發生交叉反應。

5. 既可用于定性檢測，又可用于定量檢測。用于定量檢測時，線性范圍至少5個數量級。

6. 本產品足夠50次20 μL體系的探針法熒光定量PCR反應。

7. 本產品只能用于科研。

規格及成分

成分	規格	包裝
2×Probe qPCR MasterMix	0.5mL	0.5mL本色管
熒光PCR專用模板稀釋液	1mL	1.5mL綠蓋管
超純水	1mL	1.5mL藍蓋管
禽腺病毒I群qPCR引物-探針干粉	50次	0.5mL棕色管
禽腺病毒I群陽性對照(1E7拷貝/μL)	50μL	0.5mL黃蓋管
使用手冊	1份	無
本產品采用五孔盒包裝
注意：引物探針干粉在使用前需要短暫離心，然后在離心管中加入165 μL的超純水充分混勻后得到引物探針混合液再使用，未用完的需要-20℃保存。

使用方法

稀釋標準曲線樣品以1E1-1E6拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例

由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分。本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供DNA片段作為陽性對照。

1. 標記6個離心管，分別為6，5，4，3，2，1。

2. 用帶芯槍頭分別加入45μL熒光PCR專用模板稀釋液，用帶芯槍頭（下同）。

3. 在6號管中加入5 μL 1E7拷貝/μL的陽性對照(試劑盒提供)，充分震蕩混勻1分鐘，得到1E6拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。

4. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1E6拷貝/μL的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩混勻1分鐘，得到1E5拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。

5. 換槍頭，在4號管中加入5 μL 1E5拷貝/μL的陽性對照(上步所得)，充分震蕩混勻1分鐘，得到1E4拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。

6. 依次重復上面的操作得到6個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。

樣品DNA的制備

7. 如果有N個樣品，設置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）。可以用10 μL上步所得4號稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。

8. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數樣品DNA提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的免提取核酸釋放劑。

Probe qPCR反應20μL體系，在樣品制備室進行

9. 如果做定量分析并且只做1次重復，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照（用水做模板），6個用于標準曲線。如果做定性分析并且只做1次重復，則標記N+4個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照（用水做模板），1個用于PCR陽性對照（直接用第6步第4號管的陽性對照稀釋液做模板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。

數據處理

1. 如果擴增陽性對照或制備陽性對照結果為陰性，則整個擴增或制備實驗無效，不需要分析數據，需要重做擴增或制備或跟廠家聯系。如果擴增陰性對照或制備陰性對照結果為陽性，說明環境污染，則整個擴增或制備實驗無效，不需要分析數據，需要跟廠家聯系，購買新的引物和探針。

2. 如果陰性對照和陽性對照正常，則實驗有效，可以進入后續分析。

3. 如果把本試劑盒用于定量檢測，則以陽性對照濃度的log值為橫軸，以Ct值為縱軸，繪制標準曲線。再以待測樣品的Ct值從標準曲線上推算出樣品DNA濃度的log值，再推算出其濃度。

4. 如果把本試劑盒用于定性檢測，只判斷陽性或陰性，則陰性對照必須無Ct或Ct大于或等于40。陽性對照必須有熒光對數增長，有典型擴增曲線，Ct值應該小于40，否則實驗無效。如果實驗有效，則分析待測樣品，如果無Ct或Ct大于或等于40，則為陰性。如果Ct小于40則為陽性。
自備試劑

超純水，樣品DNA

運輸及保存

低溫運輸，-20℃保存，有效期2年

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禽腺病毒I群探針法熒光定量PCR試劑盒

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