植物組織直擴PCR試劑盒

品牌：紀寧生物
貨號：JN30500
規格： 80T

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植物組織直擴PCR試劑盒
描述：
RAPA3G DNA 聚合酶為經電子重構架的第三代 TaqDNA 聚合酶，第三代 DNA 聚合酶具有高度的雜質耐受性、長片段擴增能力、高擴增成功率、高產量，這些特點使得RAPA3G 系列產品可用于粗制樣品的直接擴增，無需核酸純化步驟。該 PCR Mix 具有 5’-3’的聚合酶活性、5’-3’的外切酶活性、3’-5’的外切酶活性，產物部分帶有”A“尾巴，部分為平末端，因此產物可用于 TA 克隆或平端克隆。
特點和用途：
（1）高雜質耐受性：該 PCR Mix 可直接使用多糖多酚含量極高的葉片等材料進行 PCR 擴增，無需基因組提取。
（2）高效的快速 DNA 釋放劑：盡管該 PCR Mix 可以直接使用葉片進行擴增，但我們仍然推薦采用 DNA 釋放劑進行樣本的快速前處理（約需要 5min，可高通量操作）。DNA 釋放劑的前處理，使得制備的 DNA 模板可以進行多次、多基因擴增，并長期保存植物 DNA，經 DNA 釋放劑處理的樣本，在室溫條件下放置 1 個月，無任何后續影響，-20 可長期保存。
（3）快速 PCR：該酶具有 6kb/min 以上的擴增速度，可顯著的縮短 PCR 的擴增時間，在常規測試條件下，10s 的延伸時間可完成 1kb 的基因組 DNA 擴增。
（4）粗制樣品的擴增能力：擴增能力>1.7kb。
（5）高保真性能：該制品包含一定比例的 RAPA HiFi 超保真 DNA 聚合酶，因此其具有一定的保真性能（經藍白斑測試，其保真性能約為 Taq DNA 聚合酶的 56 倍）。
（6）熱啟動，防止非特異性擴增：RAPA3G 系列產品均采用 HaiGene 專有的熱啟動技術，確保 50 度以下完全無活性，僅有 95 度加熱 5min 以后才能恢復其活性，因此可最大限度的提高擴增的特異性，減少非特異性產物的產生。

儲存：

長期儲存置于-20°C 以下，可保存 2 年；短期使用置于 4°C（3 個月）保存。
使用方法：
1. DNA 釋放：
（1）采用加熱法：取 2-3mm 直徑葉片（白 Tip 頭上沿大小）、1-10mg 果實等材料，放入到 0.2ml EP 管中，加入 50 μl 快速 DNA 釋放劑 A，于 PCR 儀中 98°C 加熱 5min，加熱完畢后加入 50 μl 快速 DNA 釋放劑 B，混合均勻，即可使用。
（2）采用鋼珠研磨法：取 2-3mm 直徑葉片、1-10mg 果實等材料，放入到 2ml EP 管中，加入 250 μl 快速 DNA 釋放劑 A 和 2-3 粒鋼珠，研磨 1-2min 成漿體裝。研磨完畢后加入 250 μl 快速 DNA 釋放劑 B，混合均勻，即可使用。
2. 按下表配制 PCR 反應體系并混合均勻：

3.請注意：

（1）該制品為熱啟動制品預變性步驟 5min 不可縮短，否則 DNA 聚合酶無法恢復活性。（2）當擴增片段<1kb時，延伸時間使用 15s；擴增片段 1-2kb 時,延伸時間使用45s，擴增片段 2-3kb 時,延伸時間使用 1min，當擴增片段>3kb 時，請按照 2kb/min 的延伸時間進行設置。(3)盡管該酶具有 6kb/min 的延伸速度，但按照 2kb/min 設置延伸時間的條件下，能獲得最高的產量。
注意事項：
(1)當模板 GC 含量>70%時，請添加5× Q-Solution。
(2)當采用全血、血漿等蛋白含量極高的樣本時，擴增完畢后可能會有變性的蛋白沉淀，請離心后再進行點樣和電泳。

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