69-78-3/5,5-二巰基-2,2-二硝基苯甲酸的制備方法和應(yīng)用探究

背景及概述^[1]

又叫DTNB即(5,5'-Dithiobis-(2-nitrobenzoic acid))，是5,5-二巰基-2,2-二硝基苯甲酸的簡(jiǎn)稱(chēng)，DTNB一種廣泛用于在生物化學(xué)領(lǐng)域的分析試劑，

制備^[1]

一種5,5-二巰基-2,2-二硝基苯甲酸全合成方法，包括：

硝化步驟：向250mL配有攪拌器、冷凝管和溫度計(jì)的三口瓶中，加入24.3mL(0.2mol)間溴甲苯中滴加28mL混酸，控制滴加速度，以使溶液的溫度處于45-55℃，滴加完畢合，保持50℃反應(yīng)2h，棄去酸層，有機(jī)相用甲苯萃取，合并萃取液，干燥，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得到淺黃色針狀產(chǎn)品29.1g(0.135mol)，即2-硝基-5-溴甲苯，收率為67.4％，熔點(diǎn)為55-56℃；

氧化步驟：將21.6g(0.1mol)硝化步驟得到的2-硝基-5-溴甲苯加100mL水?dāng)嚢杓訜嶂?0℃，加入800g 5wt％的高錳酸鉀(0.253mol)溶液，保溫反應(yīng)，過(guò)濾去除沉淀物，濾液用1+1鹽酸調(diào)節(jié)pH<1，收集析出物，干燥，得到2-硝基-5-溴-苯甲酸19.6g(0.0797mol)，收率為79.7％，熔點(diǎn)為138-140℃；

硫化步驟：將12.3g(0.05mol)氧化步驟得到的2-硝基-5-溴-苯甲酸加50mL水溶解，調(diào)節(jié)pH>3.5，攪拌加熱至50℃，分批次加入65g 6wt％的硫化鈉(0.05mol)水溶液，保溫反應(yīng)2h，用1+1鹽酸調(diào)節(jié)pH<1，收集析出物，烘干，即得7.16g(0.0181mol)5,5-二巰基-2,2-二硝基苯甲酸，收率為72.3％；

重結(jié)晶步驟：取5.95g(0.0150mol)硫化步驟得到的5,5-二巰基-2,2-二硝基苯甲酸，加入冰乙酸重結(jié)晶，得到5.42g(0.0137mol)精制后的5,5-二巰基-2,2-二硝基苯甲酸，收率為91.0％，熔點(diǎn)236-237℃。

應(yīng)用^[2-3]

CN201510097778.3公開(kāi)了一種宮頸癌尿液檢測(cè)試劑盒，包括容器1和容器2，其中容器1中含有2ml5,5-二巰基-2,2-二硝基苯甲酸溶液，容器2中含有2ml磷鎢酸溶液。本發(fā)明還公開(kāi)了該試劑盒的使用方法，取受試者晨尿1ml，先滴加到含有DTNB溶液的容器中，靜置2-5分鐘，然后加入含有磷鎢酸溶液的容器中，靜置2-5分鐘，觀(guān)察溶液是否有顏色變化。通過(guò)顯色反應(yīng)，所述試劑盒可以方便快速地判斷受試者是否患有宮頸癌。

CN201910277653.7報(bào)道了尿液巰基化合物無(wú)汞檢測(cè)試劑及制備方法和應(yīng)用。所述試劑包括緩沖液以及分散在緩沖液中的5,5-二巰基-2,2-二硝基苯甲酸和EDTA。所述制備方法是將上述組分計(jì)量混合。可應(yīng)用于制備尿液巰基化合物無(wú)汞檢測(cè)試劑的試劑盒。本發(fā)明提供的技術(shù)方案采用5,5-二巰基-2,2-二硝基苯甲酸作為巰基顯色劑對(duì)尿液中巰基進(jìn)行定性和定量分析，并成功將其改進(jìn)為可以產(chǎn)品的尿液檢測(cè)試劑，檢測(cè)試劑組分環(huán)境友好，其中不再含有汞等重金屬離子，使用后不會(huì)造成環(huán)境污染，也不再含有三氯乙酸等腐蝕性物質(zhì)，提高了使用安全性，并且檢測(cè)速率大大加快，從至少15分鐘縮短至5分鐘以?xún)?nèi)；綜上所述，提供的檢測(cè)試劑具有可操作性強(qiáng)，易于推廣使用的特點(diǎn)，因此市場(chǎng)前景廣闊。

主要參考資料

[1][中國(guó)發(fā)明] CN201711494442.6 一種DTNB全合成方法

[2]CN201510097778.3一種宮頸癌尿液檢測(cè)試劑盒

[3]CN201910277653.7一種尿液巰基化合物無(wú)汞檢測(cè)試劑及制備方法和應(yīng)用